膠體金檢測原理

(資料圖)

膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態(tài)，形成帶負電的疏水膠溶液，由于靜電作用而成為穩定的膠體狀態(tài)，故稱(chēng)膠體金。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團形成牢固的結合，由于這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。

膠體金除了與蛋白質(zhì)結合以外，還可以與許多其它生物大分子結合，如SPA、PHA、ConA等。根據膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學(xué)特性，因而使膠體金廣泛地應用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細胞生物學(xué)等領(lǐng)域。

膠體金標記，實(shí)質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過(guò)程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷，與蛋白質(zhì)的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質(zhì)有很強的吸附功能，可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價(jià)結合，因而在基礎研究和臨床實(shí)驗中成為非常有用的工具。

免疫金標記技術(shù)(Immunogold labelling techique) 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，在金標蛋白結合處，在顯微鏡下可見(jiàn)黑褐色顆粒，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時(shí)，肉眼可見(jiàn)紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中，這一反應也可以通過(guò)銀顆粒的沉積被放大，稱(chēng)之為免疫金銀染色。

膠體金免疫層析測試卡的結構，由樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊構成。其中，膠體金顆粒上修飾有檢測抗體，硝酸纖維素膜上有檢測線(xiàn)和控制線(xiàn)。檢測時(shí)，被測樣本在毛細作用下通過(guò)膠體金標記的抗體，形成抗原抗體膠體金復合物，復合物繼續爬行，通過(guò)包被有捕捉抗體的檢測線(xiàn)，形成雙抗體夾心膠體金復合物，在檢測線(xiàn)處呈現色帶。過(guò)量的膠體金抗體流過(guò)檢測線(xiàn)，在之后的控制線(xiàn)上形成膠體金免疫復合物，呈現色帶。需要注意的是，控制線(xiàn)上色帶的形成與被檢測物質(zhì)的存在與否無(wú)關(guān)，即使樣本里沒(méi)有被檢測的物質(zhì)，控制線(xiàn)也會(huì )顯現。這種“捕捉抗體-抗原-檢測抗體-膠體金納米顆粒標記物”復合結構被稱(chēng)為雙抗體夾心結構，膠體金為指示標記。最典型的產(chǎn)品是“早早孕”試紙條，采用雙抗體夾心一步法技術(shù)，以膠體金為指示標記檢測尿液中的人絨毛膜促性腺激素（Human Choionic Gonadotophin，HCG）濃度，以判斷受檢者是否受孕。

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